《斯巴达300勇士》讲述了人类历史上最残酷的战争之一——温泉关之战。公元前480年，波斯国王薛西斯一世（罗德里格·桑托罗饰）亲自率领30万大军进攻希腊。面对来势汹汹的波斯军队，希腊各城邦迅速集结，组成联军共同抵御入侵。
希腊防线的最前沿设在温泉关，由斯巴达国王列奥尼达（杰拉德·巴特勒饰）率领本城300名精锐士兵以及4000多名联军将士驻守。由于叛徒出卖，波斯军队找到迂回路线，从希腊军队后方形成合围之势。为保全联军力量，列奥尼达下令联军先行撤退，自己则带领300名斯巴达勇士留下断后，死守温泉关。
面对数十万波斯大军的步步逼近，这群早已知晓结局的斯巴达士兵反而斗志高昂，在战场上爆发出惊人的战斗力。激战持续了整整两天，最终列奥尼达与300名精兵全部阵亡，而波斯军队也付出了两万多人的伤亡代价，薛西斯一世的两名兄弟同样战死于这场战役。
